光學(xué)顯微鏡的圖像形成原理主要基于凸透鏡的成像原理,通過物鏡和目鏡的兩次成像來實(shí)現(xiàn)對微小物體的放大觀察。以下是詳細(xì)的圖像形成原理介紹:
一、物鏡的D一次成像
成像位置:當(dāng)物體被放置在物鏡(凸透鏡1)的一倍焦距和兩倍焦距之間時(shí),根據(jù)物理學(xué)的原理,物鏡會形成一個放大的、倒立的實(shí)像。這個實(shí)像位于物鏡的后方,且距離物鏡大于一倍焦距但小于兩倍焦距。
成像特點(diǎn):由于是倒立的實(shí)像,所以物體的上下和左右方向在D一次成像后都會發(fā)生顛倒。此外,由于物鏡的放大作用,實(shí)像的尺寸會比原物體大。
二、目鏡的D二次成像
成像位置:以D一次成像的實(shí)像作為“物體",目鏡(凸透鏡2)會對其進(jìn)行D二次成像。由于觀察時(shí)是在目鏡的另外一側(cè),根據(jù)光學(xué)原理,目鏡會形成一個放大的、正立的虛像。這個虛像位于目鏡的前方,且距離目鏡小于一倍焦距。
成像特點(diǎn):由于是虛像,所以像和物在同一側(cè),且像的大小進(jìn)一步被放大。同時(shí),由于虛像是正立的,所以觀察者看到的圖像與D一次成像的實(shí)像相比,上下和左右方向都會得到恢復(fù)(即與實(shí)物方向一致)。
三、現(xiàn)代顯微鏡的復(fù)雜成像系統(tǒng)
無限遠(yuǎn)色差校正光學(xué)系統(tǒng)(ICS):現(xiàn)代顯微鏡通常采用無限遠(yuǎn)色差校正光學(xué)系統(tǒng)來提高成像質(zhì)量。在這種系統(tǒng)中,物體被物鏡記錄下來后,以平行的波陣或射線束投射到無限遠(yuǎn)處。然后,通過管狀透鏡對平行光線束進(jìn)行聚焦,產(chǎn)生一個位于目鏡內(nèi)前焦平面的放大的中間圖像。目鏡再將這個中間圖像轉(zhuǎn)化為平行光線,投射到觀察者的眼睛或成像傳感器上。
數(shù)值孔徑與放大率:顯微鏡的放大率受到數(shù)值孔徑的限制。數(shù)值孔徑是物鏡角度孔徑的正弦值乘以成像介質(zhì)的折射率。在選定的數(shù)值孔徑下,顯微鏡呈現(xiàn)的放大圖像的大小相當(dāng)于人眼的分辨率極限。超過此點(diǎn)的進(jìn)一步放大不會導(dǎo)致更精細(xì)的試樣細(xì)節(jié)的分辨率提高,反而可能導(dǎo)致圖像退化。
四、圖像形成的物理過程
照明與光線傳播:在光學(xué)顯微鏡中,照明源的光通過聚光鏡照射到試樣上。一部分光線在試樣中不受干擾地通過(直射光),代表背景光;另一部分光線與試樣相互作用后發(fā)生偏離或衍射(衍射光)。
衍射與干涉:衍射光與直射光在物鏡后焦平面上產(chǎn)生干擾,形成包含從非常暗到非常亮的各種灰度值的圖案。這些明暗圖案就是我們所觀察到的圖像。目鏡的眼透鏡進(jìn)一步放大這個圖像,最后投射到視網(wǎng)膜、照相機(jī)的膠片平面或光敏數(shù)字圖像傳感器的表面。
綜上所述,光學(xué)顯微鏡的圖像形成原理是一個復(fù)雜的光學(xué)過程,涉及物鏡的D一次成像、目鏡的D二次成像以及現(xiàn)代顯微鏡的復(fù)雜成像系統(tǒng)等多個方面。通過這個過程,顯微鏡能夠?qū)崿F(xiàn)對微小物體的放大觀察和分析。